ساخت بکمیدهای نوترکیب واجد ژن هماگلوتینین ویروس آنفلوانزای انسانی
نویسندگان
چکیده
هدف: ویروس آنفلوانزای a (h1n1) از مهمترین زیرگونههای ویروس آنفولانزاست که منجر به پیامدهای متعددی در جهان شده است. هماگلوتینین یکی از مهمترین آنتیژنهای این ویروس میباشد که باعث ایجاد پاسخ ایمنی میشود. اتصال این پروتئین به گیرندههای سلول میزبان منجر به شروع فرایند بیماریزایی میشود. با توجه به نقش حیاتی مرحله اتصال ویروسی، این پژوهش درصدد استخراج و جایسازی ژن هماگلوتینین و زیرواحد بزرگ آن (ha1) با هدف تولید شاتل ناقل نوترکیب باکیولوویروس (بکمید) برای تولید پروتئین نوترکیب در سلولهای حشره است. مواد و روشها: ویروس آنفلوانزای انسانی a/new caledonia 99/20/(h1n1) در کشت سلولی mdck تکثیر شده و rna کامل ویروسی توسط محلول easy–red تخلیص شد. سپس طول کامل ژن هماگلوتینین و ژن ha1 توسط روش rt-pcr و آغازگرهای اختصاصی تکثیر و ابتدا در ناقل pgem-teasy و سپس در پلاسمید pfastbac ht جایسازی شد. در نهایت بکمید نوترکیب واجد ژنهای فوق در سلولهای میزبان dh10bac تولید شد. نتایج: محصولات pcr ژن هماگلوتینین با الکتروفورز روی ژل آگارز و هضم با آنزیمهای محدودالاثر ارزیابی شد. ناقل نوترکیب pgem-teasy و پلاسمید دهنده نوترکیب pfastbac ht توسط روش pcr، هضم آنزیمی و تعیین ترادف تأیید شد. تولید dna نوترکیب بکمیدی نیز توسط افتراق کلونیهای آبی-سفید، الکتروفورز روی ژل آگارز 7/0 درصد، pcr با استفاده از آغازگرهای اختصاصی و آغازگرهای puc/m13 مورد تأیید قرار گرفت. نتیجهگیری: در این پژوهش، بکمید نوترکیب واجد ژن هماگلوتینین و زیرواحد بزرگ آن با موفقیت ساخته شد. در ادامه سلولهای حشرات بهمنظور تولید باکیولوویروس نوترکیب با سازههای فوق ترانسفکت شده و پروتئینهای نوترکیب برای مطالعات آتی تولید خواهد شد.
منابع مشابه
طراحی و ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن Vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی (HIV) با استفاده از وکتور EGFP-N1
Background and purpose: The purpose of this study was to design a recombinant vector pEFGP- N1 containing the full length of HIV-1Vpr gene. To the best of our knowledge, the cloning of Vpr gene in pEGFP_N1 is not previously done. Materials and methods: As a source of Vpr gene the pUC19-Vpr recombinant vector was confirmed by digestion with restriction enzymes BglII and NotI in order to separ...
متن کاملطراحی و ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی (hiv) با استفاده از وکتور egfp-n۱
سابقه و هدف: در این پروژه، هدف کلی تحقیق طراحی و ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن تمام طول vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی (hiv-1) با استفاده از وکتور pegfp-n1 بود. کلونینگ ژن vpr قبلاً درون وکتور pegfp_n1 صورت نگرفته بود. مواد و روش ها: وکتور puc19 دارای ژن تمام طول vpr جهت تایید با استفاده از آنزیم های محدود کننده برش داده شد. سپس جهت اضافه کردن سایت های برش آنزیمی (xhoi, kpni) در ژن مورد نظر مطا...
متن کاملطراحی، ساخت و بیان وکتور نوترکیب ژن نوکلئوپروتیین ویروس هاری
Background: Rabies is an acute encephalitis that causes more than 60,000 deaths worldwide. The only way to save individuals bitten by a rabies-infected animal is the timely use of effective vaccines. Treatment with new generation vaccines is expensive. Therefore, there is a global movement towards the production of less expensive vaccines which retain and improve upon the quality and effectiven...
متن کاملردیابی سرمی و مولکولی حضور هماگلوتینین ویروس آنفلوانزای انسانی در طیور تهران و اطراف تهران
چکیده ندارد.
15 صفحه اولمقایسه توالی اسیدهای آمینه در محل شکسته شدن پروتئین هماگلوتینین سه ویروس آنفلوانزای طیور (H9N2)
متن کامل
طراحی، ساخت و بیان وکتور نوترکیب ژن نوکلئوپروتیین ویروس هاری
زمینه و هدف: هاری (rabies) یک آنسفالیت حاد است که سالانه سبب مرگ بیش از 60.000 انسان در جهان می شود. تنها راه نجات بیماران استفاده ی به موقع از واکسن های کارآمد است. هدف از این مطالعه معرفی یک سیستم بیانی یوکاریوتی جدید به منظور بیان ژن نوکلئوپروتیین (n) ویروس هاری می باشد. این سیستم جهت ارزیابی و ساخت واکسن ضد هاری به کار می رود. روش بررسی: توالی کامل ژن n سویه pv ویروس هاری به روش reverse tra...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
پژوهش های آسیب شناسی زیستیجلد ۱۴، شماره ۴، صفحات ۳۹-۴۹
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023